胃癌患者p53基因甲基化的研究

作者应用限制性内切酶ＨｐａⅡ和ＭｓｐⅠ酶切胃癌组织及正常胃组织ＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增ｐ５３基因第５外显子，琼脂糖凝胶电泳分析其电泳图谱，比较胃癌组织及正常胃组织ｐ５３基因第５外显子特定序列５′－ＣＣＧＧ－３′位点甲基化差异。结果显示：１５例胃癌组织中１２例ｐ５３基因第５外显子出现高甲基化状态，而１０例正常胃组织为低甲基化状态，结果提示，ｐ５３基因高甲基化状态与胃癌发生有关。     

食管癌细胞Eca9706 DNA聚合酶β基因敲除载体的构建

目的构建食管癌细胞Eca9706 DNA聚合酶β（DNA polβ）基因敲除载体,为DNA polβ基因敲除奠定基础。方法应用体细胞基因敲除技术的方法和原理,根据DNA polβ基因序列,设计并合成2对特异性引物（UP1/UP2和DOWN1/DOWN2）,通过PCR扩增获得上游同源序列（UP）和下游同源序列（DOWN）,其中上游同源序列长1 268 bp,下游同源序列长2 150 bp,将其插入骨架载体pcDNA3.1,从而构建了DNA polβ基因敲除载体pOUT-polβ,最后用PCR、酶切和测序进行鉴定。结果经过PCR筛选,限制性酶切及DNA测序鉴定,证实上游同源序列（UP）和下游同源序列（DOWN）2个片段插入正确。结论通过本研究所述方法,成功构建了用于食管癌细胞Eca9706 DNA polβ基因敲除载体pOUT-polβ。     

卵巢透明细胞癌基因突变特征及相关靶向和免疫治疗研究进展

卵巢透明细胞癌(ovarian clear cell carcinoma, OCCC)是上皮性卵巢癌中特殊的组织病理学类型,对铂类为基础的化疗表现出原发性耐药,预后极差。深入研究OCCC独特的分子突变特征有助于在靶向和免疫治疗方面获得突破,对提高治疗效果和改善患者预后有重要意义。本文对近年来OCCC靶向治疗相关基因突变特征(例如ARID1、PI3K/AKT/mTOR、APOBEC等)进展进行全面综述和深入阐述。     

人肺癌组织3p和9p丢失的研究

目的 :探讨间期核荧光原位杂交检测肺癌和癌旁支气管上皮细胞中 3p、9p丢失以及将其应用肺癌早期诊断的可行性。方法 :选取DNA特异的 3p、9p探针 ,以荧光原位杂交方法对 2 1例短期培养的肺癌和癌旁支气管上皮细胞中 3p、9p丢失进行分析。结果 :3p、9p丢失在癌旁支气管上皮细胞中为14 2 9% (3/ 2 1)、2 8 5 7% (6 / 2 1) ;在肺癌细胞中为 6 6 6 7% (14 / 2 1)、80 95 % (17/ 2 1)。 3p、9p均丢失者在肺癌细胞中占 5 7 14 % (12 / 2 1) ,在癌旁支气管上皮细胞中为 0。结论 :①间期核荧光原位杂交可以检测肺癌及癌旁上皮细胞中 3p、9p的丢失 ;② 3p、9p的丢失在肺癌细胞中是频发事件 ,明显高于癌旁支气管上皮细胞 ;③检测 3p、9p的丢失可为肺癌的早期诊断提供新的途径     

XRCC1基因多态性与贲门癌的发病风险

目的通过病例-对照研究,探讨X-射线交错互补修复基因1(X-ray repair cross-complementing gene 1, XRCC1)基因多态性与贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma, GCA)发病风险的关系。方法采用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性技术检测455例GCA 患者和650例对照人群XRCC1 Arg194Trp、Arg280His及Arg399Gln 3个多态性位点基因型和等位基因频率分布情况。结果XRCC1 Arg194Trp及Arg399Gln多态位点的基因型及等位基因型频率的分布在患者组和对照组之间无明显的差异（P>0.05）。但以吸烟和家族史状况分层分析发现,吸烟组中GCA患者280位点的His等位基因频率为11.5％,明显高于对照组8.2％,GCA患者组和健康对照组中Arg/Arg、Arg/His、His/His三种基因型频率分别是77.9％、21.2％、0.9％和84.9％、13.7％、1.4％,两组相比差异具有统计学意义（χ²=4.107,P=0.043）。与Arg/Arg基因型相比,携带His等位基因（Arg/His+His/His）可明显增高吸烟人群GCA的发病风险（OR=1.572, 95％CI=1.00~2.51）。结论本研究结果提示XRCC1基因Arg194Trp、Arg399Gln多态位点可能与GCA的发病风险无关,但Arg280His多态的His等位基因型可能增加吸烟人群GCA的发病风险。     

转染 p53基因对肺腺癌细胞株裸鼠 移植瘤生长的影响

目的：探讨转染野生型 p53（ wt-p53）和突变型 p53（ mt-p53）基因对人肺腺癌细胞株 GLC-82裸鼠移植瘤生长的影响。方法：采用脂质体介导法,分别将 wt-p53和 mt-p53基因导入人肺腺癌细胞株 GLC-82,在裸鼠体内、体外实验中检测转导细胞的生长状况和裸鼠致瘤性。结果：转染 mt-p53 基因的细胞株 G418筛选的细胞集落数、 3H-TDR掺入实验、软琼脂平皿细胞集落数,以及裸鼠瘤组织重量和体积均高于对照组（ P<0.01）,而转染 wt p53基因的细胞株均显著低于对照组（ P< 0.01）,表明导入 wt p53基因的细胞株瘤细胞生长速度明显低于对照组细胞株和导入 mt p53基因的细胞株,即导入 mt p53基因的细胞株瘤细胞生长速度最快,而导入 wt p53基因的细胞株瘤细胞生长速度最慢。结论： wt p53基因能有效抑制人肺腺癌细胞生长; mt p53基因则可以明显地促进瘤细胞生长。     

THE EFFECTS OF TRANSCRIPTION AND TRANSLATION INHIBITION ON NONTARGETED MUTAGENESIS IN MAMMALIAN CELLS

在研究ＭＮＮＧ所致哺乳类细胞非定标性突变时相变化的基础上，以ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ（ＡＭＤ）和蛋白质合成抑制剂放线菌素酮（ＣＨＭ）在ＭＮＮＧ处理后非定标性突变频率最高的６ｈ点分别阻断ＤＮＡ转录和翻译，发现ＡＭＤ能使ＭＮＮＧ诱导的ｖｅｒｏ细胞非定标性突变率下降至对照水平，而ＣＨＭ则使其明显上升。提示ＭＮＮＧ引起的ＤＮＡ损伤能够通过诱导某些基因的表达或干扰某些蛋白质的功能而导致基因组遗传不稳定。     

人CD80重组腺病毒感染的肺癌细胞的生物学特性

目的：研究c-myc对人端粒酶逆转录酶（htert）启动子的调节作用。方法：采用Lipofect脂质体转染法将DNA质粒分别转染至肝癌细胞HepG2、猴肾COS－7细胞和NIH3T3细胞,孵育48h后,分别检测其报告基因萤虫素酶活性。结果：与对照组相比,载有htert80bp启动子的质粒TERTLuc(800)在肿瘤细胞HepG2中活性显著增强。外源性转因子c-myc可显著上调htert启动子的表达,其激活作用与剂量呈正相关。人工突变c-myc结合位点明显降低htert启动子的活性。结论 ：c-myc可直接激活ht ert启动子的表达,是调节端粒酶活性的重要转录因子。     

敲降HE4 和PAX8 基因对TC方案治疗上皮性卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨敲降人附睾蛋白4（HE4）和配对盒基因8 抗原（PAX8）基因后对紫杉醇药+铂类药（TC方案）治疗的上皮性卵巢癌OVCAR3 细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法：分别设计和合成敲降HE4 和PAX8 的单靶siRNA（HE4-siRNA 或PAX8-siRNA）及双靶siRNA（HE4+PAX8-siRNA）和阴性siRNA 序列,并与质粒载体pGCsi-H1 相连形成重组质粒,分别转染人上皮性卵巢癌OVCAR3 细胞形成HE4-siRNA 组、PAX8-siRNA 组、HE4+PAX8-siRNA 组和siRNA-NC组,同时设立空白对照组（无任何处理）。用TC方案（紫杉醇3.13 μg/ml +卡铂2.82 μg/ml,）分别处理上述5 组细胞后,用MTT法、划痕愈合实验、Transwell 侵袭实验、流式细胞术检测各组细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡能力的变化。结果：敲降HE4 和PAX8 基因后,与siRNA-NC组和空白对照组比较,HE4-siRNA组、PAX8-siRNA 组、HE4+PAX8-siRNA 组卵巢癌OVCAR3 细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降低（均P<0.01）,细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,尤以同时敲降HE4 和PAX8 基因的效果更佳。结论: 敲降HE4 和PAX8 基因均可增强TC方案抑制上皮性卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭能力并促进其凋亡,尤以HE4 和PAX8 基因同时敲除的效果更好。     

免疫组化法检测EML4-ALK融合突变价值的meta分析

背景与目的 棘皮动物微管相关蛋白4(echinoderm microtubule-associated protein 4,EML4)与间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphatic tumor kinase,ALK)重排形成的融合基因存在于大约5％的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者中,是继表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、K-ras之后又一新型靶点基因.有数据显示携带EML4-ALK融合基因的NSCLC患者接受ALK抑制剂治疗后,其疾病控制的有效率可达80％,探索和建立能够准确快速检测出NSCLC患者EML4-ALK融合突变的方法,是筛选出适合治疗的优势人群的关键.本研究分析免疫组化法(immunohistochemistry,IHC)检测EML4-ALK融合基因突变的敏感度与特异度,评价该方法准确性及临床应用价值,从而为肺癌患者“个体化分子治疗”提供依据.方法 通过Pubmed数据库检索所有符合检索条件的文献,末次检索日期为2015年2月25日,根据纳入和排除标准进行进一步筛选,采用诊断试验meta分析方法,比较特异性抗体免疫组化法与“金标准”荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)法的敏感度、特异度,以明确特异性抗体IHC作为筛查方法的可行性.结果 本文11篇文献纳入meta分析,EML4-ALK融合基因免疫组化累计病例3,234例,诊断比值比(diagnositic odds ratio,DOR)为1,135.00(95％CI:337.10-3,821.46);综合受试者工作特征曲线(summary receiver operating characteristic curve,SROC)下面积为0.992,3(SEAUC=0.003,2),Q*统计量为0.964,4(SEQ*=0.008,7).结论 特异性抗体IHC法检测EML4-ALK融合基因的方法可行,具有高特异度和敏感度,可作为一种简单快速的筛查方法,具有临床应用价值.